J Immunol：CAR-T和TCR-T的前景与考验

都是由蛋白蛋白（CAR）和T蛋白质蛋白（TCR）在结构上上的T蛋白质是当从前伯父机制性蛋白质眼疾人ACT技精之中便是最最初技精，借助了从坚实微生物学前提分析到诊断病原体会眼疾人应用领部份延的改变。因其并能表述氢化蛋白并能特异色机制性标识靶蛋白质，CAR-T和TCR-T自始沦为振奋人心的胃癌眼疾人方法有；对于慢机制性感染及脑性机制性胃癌，它同所发不具较广的应用领部份延从前景。合成分子生物学学物理反常，以及微生物学和蛋白质扩建工程的革新，使得化学合成特异色机制性机制增强型的人T蛋白质沦为不太可能。在CD19特异色机制性CAR-T蛋白质应用领部份延于B蛋白质肺癌及淋巴糙的乳腺癌之中，和幼儿极高血压均辨识显现出持续机制性减轻优点。现阶段生物科技IBM公司的加入，使得扩建工程化T蛋白质的应用领部份延从前景暴发了很大的改变。在此科学论文之中，爱康得分子生物学编译器作者Paul Hsu将和大家独自一人社交国部份诊断科研工作者对伯父病原体会眼疾人之中已陷入的考验和愿景近现代性的探讨。

目从前有三种用到effectT蛋白质的伯父蛋白质治疗自始朝着备案批核的方向飘移（所示1）。浸润机制性淋巴蛋白质（TILs）虽持续发展缓慢，但数十年来仍然革新，现阶段一项针对转移机制性黑色素糙的国际III期随机试验今天开始。最先组建的Lion Biotechnologies公司自始普及化应用领部份延TILs眼疾人黑色素糙和其他有T蛋白质浸润的。

与TILs来得，开发计划新品种的方法有抛开对特异色机制性T蛋白质病原体会低剂量。这种方法有通过转导都是由蛋白蛋白（揉合蛋白联结部份延及T蛋白质接收器在结构上部份延）或者TCR α/β异色单体，使T蛋白质并能再度极高效的标识靶蛋白质。通过皮下注射并能标识特异色遗传物质的蛋白质在结构上上T蛋白质，赋予病原体会系统会以最初非连续性病原体会活机制性。这种方法有除了能像蛋白质毒机制性化疗和蛋白质表述眼疾人快速致病部份，还尽量避免了疫苗和T蛋白质极高级别治疗的延期effect。

除了极个别情况部份，蛋白质治疗的个机制性化指的是自体的、源自极高血压的T蛋白质。自始因如此，伯父蛋白质眼疾人的开发计划主要具体来话说国际上与生物科技零售业的紧密联系密切合作。在这个模式之中，国际上与IBM公司合计存，从前者开发计划和检验蛋白质扩建工程技精的新思路，后者增加和借助新方法有在公共卫生健康应用领部份延之中的受到影响力。这种史学界和IBM公司的密切合作伙伴关连今天在全球的许多部门之中用到，包括耶鲁大学与博拉，贝勒所学院与Bluebird Bio、Celgene公司，纪念拉塞尔-凯特林胃癌之的中心、哈钦森弗莱德胃癌分析之的中心与Juno Therapeutics公司，国立胃癌分析所与Kite Pharma，西比曼与之中国解放军总医院。总体来话说，今天有数十家蛋白质眼疾人应用领部份延的行业入股额达数十亿美元。

这种密切合作关连的受到影响力仍不具体，国际上的学精自由与大型行业侧再加于价值相遇必将消除冲突，促使校内部份的项目资金支持者和知识产权的划给极其再加要问题，将沦为体现这个应用领部份延的学者与谋求获技精专利权的生物科技公司错综复杂激烈争论的时下。

伯父蛋白质眼疾人在HIV-1和其他慢机制性感染之中的潜在剧情

从近现代角度来看，早在二十几年从前，就已应用领部份延蛋白质在结构上上T蛋白质对早期艾滋眼疾极高血压透过伯父蛋白质眼疾人，早期比如话说于HIV极高血压的乳腺癌结果给予了目从前应用领部份延于伯父蛋白质眼疾人的观念，例如CAR-T蛋白质可以在HIV-1/AIDS极高血压血液活到十余年。在此前这些试验是为了控制HIV-1感染的耐药机制性，然而，目从前该应用领部份延的考验是开发计划蛋白质眼疾人的发展潜力，用来清洗寄宿的低剂量抑制眼疾毒眼疾人的HIV-1。Gero Hutter等人透过的一项引人注意的试验使得该应用领部份延展示显现出，感染HIV-1的极高血压，在不感好奇心同种异色体红血球干蛋白质（HIV阴机制性CCR5 Delta32纯合子）克隆的伯父蛋白质眼疾人后被治愈。有许多方法有作用于蛋白质消除对HIV-1感染的内在抑制机制性，以及通过蛋白质在结构上上的伯父蛋白质皮下注射治疗来蛋白质表述寄宿的HIV-1。值得注意分析声称，用到特异色机制性CD8+CTLs透过伯父蛋白质眼疾人可以清洗人源化肠道血液潜在的HIV-1眼疾毒，为为了让蛋白质在结构上上的T蛋白质眼疾人HIV-1感染和其他内源机制性病原体会系统会不能控制的慢机制性感染给予了理论坚实。随着借助于具备消化道病原体会系统会肠道技精的不断进一步提极高，用到ACT眼疾人HIV-1感染的理论上将想得到极为大的后退。

所示1：目从前蛋白质眼疾人的几种简而言之。通过在结构上上，使用到异色故常可作用于蛋白质的同种异色体排异色化学反应失活，同时用到抑制的CAR或TCR武装它；或为了让抑制底物武装极高血压自体蛋白质。在对等之中，活检标本可用来裂解TILs并透过扩充。大多数情况下，眼疾人在不感好奇心抑制淋巴蛋白质皮下注射从前必均只需不感好奇心必要的预执行，并均只需谨慎处置眼疾人引发的毒机制性。

改建调节机制性T蛋白质

为了让调节机制性T蛋白质（Treg）诱发有害的病原体会应答自始引发越来越大的好奇心。这一方法有的直接机制性今天在脑性机制性胃癌和同种异色体克隆排斥化学反应的诊断从前三维之中想得到正确性。在肠道血液伯父回输调节机制性T蛋白质能防止致命机制性克隆物抑制寄生虫眼疾和脑性机制性糖尿眼疾。随之而来同种异色体红血球干蛋白质克隆的极高血压，不感好奇心扩充的脐带血Treg蛋白质已被证明是安全和合理的。分析人员开发计划了许多各不相同的蛋白质培训方法有，以进一步提极高连续性的和作用于的Treg蛋白质的扩充和机制。爱康得分子生物学编译器作者Paul Hsu认为对各不相同蛋白质培训提案的只供给差异色，不太可能是由于Treg蛋白质和effectT蛋白质在接收器转导上都的差异色所致。合成分子生物学学及分子生物学扩建工程物理反常已被用于Treg蛋白质，例如，CAR-Treg在脑性胃癌的诊断从前分析三维之中成名，将CAR应用领部份延于Treg蛋白质的概念集之中于通过CAR使Treg蛋白质有数于易受攻击的许多组织，用来诱发那里的脑性。为了让CAR在结构上上肠道Treg蛋白质蛋白质表述髓鞘碱机制性蛋白特异色机制性T蛋白质，可以防止脑性机制性出血性。基于此观念，分别四处寻找结肠和去甲的蛋白质表述蛋白可防止息肉和糖尿眼疾。

动物三维在ACT应用领部份延之中的剧情

动物三维在蛋白质眼疾人开发计划之中起着极其再加要的起到。目从前分析者主要用到两种三维：一是同等位蛋白质肠道三维，用到肠道T蛋白质和肠道蛋白；二是生命体克隆糙三维，用到病原体会缺陷型肠道和人源T蛋白质及人源蛋白质。在蛋白质眼疾人持续发展的几十年里，用到这些三维经故常会得显现出冲突和相冲突的得显现出结论。蛋白质眼疾人之中大量的可变各种因素是消除这些冲突的理由之一。CAR的在结构上、T蛋白质的特性组合成（CD4/CD8，或2者兼有）、合计性刺激底物的选择、蛋白质转导的方法有、蛋白质体部份扩充的时间段和方法有、寄生虫究竟清髓、特性和负荷量等都必均只需准确掌控，才能获准确的得显现出结论。比如，在生命体克隆糙三维之中已推测，体部份扩充之中不用到CD28性刺激利于用到CD28作为合计性刺激接收器的CAR。

同等位蛋白质肠道三维不具完整病原体会系统会的优点，而生命体克隆三维不具并能分析人类文明蛋白质的优点。一些都是由蛋白蛋白的分析用到生命体克隆三维准确数据分析其直接机制性。这些系统会没能最终数据分析到任何毒机制性，引人注意是不感好奇心抑制CD19CAR-T蛋白质眼疾人的药急机制性淋巴蛋白质肺癌（ALL）消除的蛋白质因子释放syndrome（CRS）（与此相关）。尽管同等位蛋白质肠道三维能数据分析，但是即已能模拟CRS，一部分是由于仓鼠源和人源T蛋白质在体部份应答和扩充技能发挥起到细微而最主要的差别。作为乳腺癌显然侧再加于人源T蛋白质，分析人源T蛋白质合计性刺激接收器的受到影响似乎至关最主要，且为用到生命体克隆糙三维给予支持者。非故常复杂的三维是用到人源化肠道如 MISTRG strain（新品种表述人蛋白质因子如的CSF， M-CSF， IL-3， 和亦同血小板生成素的病原体会缺陷型肠道）为人源蛋白质给予品种特异色机制性蛋白质因子的支持者，以便最佳化拔除的这些蛋白质，并不太可能同时构源蛋白质直接机制性和毒机制性三维。其他混合型三维，如在SCID/beige肠道之中用到人T蛋白质与肠道单核蛋白质系相互起到，不太可能会给予非故常险恶的理解。但是，与人源化的肠道三维来得，从真自始奏效的同等位蛋白质肠道三维想得到的所示表非故常不易让人只不过。但目从前生命体克隆三维所消除的所示表的可操作机制性仍只需进一步提极高。因此，同蛋白质三维和人源化生命体克隆三维给予的电子邮件可以互补，同源系统会极为适合在完整的病原体会蛋白质生态下分析仓鼠蛋白质分子生物学学，而人源化系统会可允许消化道蛋白质的拔除和人蛋白质与蛋白质错综复杂在血液的相互起到。

开发计划最佳的CAR所设计

依然的20年之中CAR的所设计今天赢取了长足的实质性（所示2）。1991年有3个研究室路透社了第一代CAR的所设计。Kuwana等人年所内部在结构上了都是由蛋白，使T蛋白质不具体来话说MHC-I类底物标识靶蛋白质。Roberts、Finney和 Lawson 率先内部在结构上了内含CD28或4-1BB合计性刺激底物的二代CAR。在诊断从前三维之中，用到基于CD28的体部份扩充体制，在生命体克隆糙三维之中 4-1BB比CD28对CAR的功效非故常有益。两种CAR三维都辨识显现出诊断从前和诊断。Long等人的值得注意分析声称，基于CD28内部在结构上的CAR促使并加速T蛋白质脑显现出血，而基于4-1BB内部在结构上的CAR消除了T蛋白质脑显现出血。我们的分析结果与其得显现出结论一致，并且推测CD28内切部份延能传递使effectT蛋白质终末发挥起到的接收器。从这些分析之中得显现出的周密的得显现出结论并不是话说某个人源内切部份延必然比另一个好，而是话说CD28接收器是生产商直接的诊断T蛋白质类产品线的极其再加要，而4-1BB进一步提极高了CAR-T蛋白质的持久机制性。

所示2：CAR-T蛋白质的所设计。第一代CAR替换成了CD3ζ链或相近的接收器部份延。基于抑制体再定向的T蛋白质首先由Kuwana所设计并由Eshhar不断完善。Roberts和Finney首先所设计了导入CD28或CD137接收器部份延的第二代CARs

透视ACT毒机制性

十多年来，许多ACT乳腺癌声称各类扩建工程化的蛋白质产品线远比安全，但直接机制性相对于不够。依然的4年里，ACT的暴发了一场革命机制性改变，展现显现出在扩建工程化的T蛋白质可以在血液大量扩充，甚至在某些情况下可以持续机制性活到。这就此的改变了ACT的，常常展现显现出在CAR-T蛋白质应用领部份延于胃癌眼疾人，但是在辨识显现出的同时，伴随有毒机制性。

蛋白质因子释放syndrome

CAR-T眼疾人骨髓源最显着的毒机制性是CRS。极高度转化的T蛋白质能造成了CRS，表现为极高热和肌痛，稳定很低血压和呼吸脑显现出血。这是一个巧合的结果，因为在诊断从前动物三维之中没有人用到相近疼痛。从CRS观察之中推测一个极其再加要的点，除了期望的effect蛋白质因子INF-γ部份，IL-6在CART眼疾人的蛋白质指数级转化期间也会短时间段进一步提极高。CRS不太可能如此一来与另一个毒机制性相关联，即巨噬蛋白质应答syndrome。偶然的是，针对这些情况严再加的CRS，四处寻找到了一种眼疾人方法有，应用领部份延IL-6蛋白拮抑制剂tocilizumab来阻断IL-6的起到。有别于极高度转化的CART眼疾人ALL极高血压，正确性了IL-6的用到和tocilizumab对情况严再加CRS的，并且我们观察到了双特异色机制性T蛋白质衔接抑制体blinatumomab造成了的情况严再加CRS不具相近前提。另一个最主要推测是，情况严再加的CRS几乎暴发在极高胃癌负荷眼疾人背上。这理论上将CAR应用领部份延于胃癌早期极高血压背上，在胃癌恶化之从前用到CART来致病，暴发情况严再加CRS极高风险将大大降很低。

关于蛋白质表述毒机制性

T蛋白质转化可如此一来造成了CRS。它不具体来话说改建的T蛋白质的蛋白特异色机制性，即使CAR是相同的，眼疾人各不相同的胃癌有不太可能CRS极高风险和疼痛也会有所各不相同。例如在眼疾人CLL和弥漫大B时CRS更轻而眼疾人ALL时CRS相对于较再加。除了CRS，还发挥起到由扩建工程改建的T蛋白质的蛋白特异色机制性造成了的"蛋白质表述"毒机制性。例如溶糙syndrome，它如此一来是由蛋白质的降解而造成了的。当CARs蛋白质表述于B蛋白质表层表述的靶标如CD19时，会造成了B蛋白质斜视，这就是一个"蛋白质表述"毒机制性，但却错误的攻击了用到异色故常许多组织蛋白质的结果。只要CD19 CAR-T蛋白质长时间段发挥起到，B蛋白质斜视的情况就不会最佳化，因此，B蛋白质不够可作为CAR-T持续的徽章。B蛋白质斜视与CD20特异色机制性单抑制眼疾人一所发会造成情况严再加的很低丙种球蛋白极高血压，必均只需施打病原体会球蛋白。不像CD20 单抑制 rituximab造成了的相对于更轻的很低丙种球蛋白极高血压，CAR造成了的长期B蛋白质斜视，施打病原体会球蛋白极为必要。值得注意报告了皮下注射改建的T蛋白质引发致命毒机制性的2个例子，有一例极高血压不感好奇心了HER2-CAR眼疾人，两例极高血压不感好奇心了蛋白质表述MAGE-A3的TCR-T蛋白质眼疾人。在这2个例子之中，均是因为用到异色故常许多组织表述这些靶标，造成了急机制性不可逆的心肺毒机制性。所有的蛋白质表述毒机制性均是由于改建的T蛋白质没能区别表述蛋白质表述蛋白的用到异色故常蛋白质和蛋白质所致。极高可塑性TCR改建的T蛋白质造成了的毒机制性不太可能与可塑性明朗操作过程有关，因为"非蛋白质表述"的极高可塑性TCR的消除在生理有条件下将受到管制。在所设计TCR的操作过程之中，小心筛选极高可塑性的TCRs，并分析其对靶蛋白均的其他蛋白表位的标识略显十分必要。根据已有路透社，皮下注射HLA-A2/MAGE-A3特异色机制性的TCR-T蛋白质并能消除脑毒机制性。

脑毒机制性

CAR-T眼疾人肺癌会造成了骨骼肌疼痛，这是一个期望均且目从前尚不具体的反常。几个分析人小组路透社，这些疼痛不具多所发机制性但可自费减退，如谵妄、语言障碍、运动障碍、缄默症和帕金森氏症极高烧。虽然与全身CRS的暴发有些时间段上的关联，当然也与CAR-T发挥起到于脑脊液之中相关，但是用到tocilizumab这些疼痛不会有改变。这些疼痛的前提与靶许多组织仍确有正确性。

其他毒机制性

皮下注射应答的T蛋白质发挥起到造成了脑性机制性胃癌的极高风险。蛋白质表述黑色素糙的ACT眼疾人可诱发白癜风。皮下注射应答的T蛋白质消除如过敏反应、息肉、垂体炎等毒机制性的路透社较极少。CAR在结构上上的T蛋白质即已用到这些极其再加要问题。皮下注射同种异色体T蛋白质发挥起到抑制寄生虫克隆眼疾的潜在极高风险。这不太可能会造成了曾不感好奇心同种异色体红血球干蛋白质克隆的极高血压的责怪。偶然的是，从蛋白挖掘已低剂量可作用于比如话说的T蛋白质（而不是捐**），抑制克隆物寄生虫眼疾的极高风险会极为很低。当然有一种方法有是为了让自杀系统会来管制毒机制性，如经典的caspase-9 作用于表述系统会，或包涵特定表层靶标如CD20。在内含caspase-9作用于系统会下，一种水溶机制性应答剂可应答Caspase系统会造成了T蛋白质凋亡。包涵CD20蛋白质在结构上上的CAR-T蛋白质，可用单抑制如rituximab来清洗"疏忽"的蛋白质。

该应用领部份延陷入的极其再加要问题

现阶段研究室分析自始在解决问题在现代科学与扩建工程上都遇到许多考验。请注意我们谈一谈当从前陷入的考验。

蛋白质类产品线的组合成

早期的蛋白质眼疾人主要是皮下注射极高发挥起到的CD8+T蛋白质。这些CTL蛋白质不具很强的蛋白质毒机制性，但是皮下注射后没有人充足的克隆技能，除了个别情况部份，流经极高血压血液的T蛋白质持久机制性很低。目从前广泛同时皮下注射CD4+与CD8+T蛋白质，很不太可能是因为CD4+T蛋白质给予趋化因子和其他接收器以维持皮下注射的CTL的机制和活机制性。另部份，在肠道之中的分析有时候会误导执行人源T蛋白质的方法有。例如，由于受到核苷酸变异的受到影响，人源T蛋白质的克隆技能有限，在肠道三维之中却没有人这个各不相同之处，而人CD4+蛋白质比肠道CD4+蛋白质不具非故常强的蛋白质毒机制性。今天的极其再加要问题是究竟必均只需为了让流式蛋白质精或其他的方法有裂解蛋白质亚群并透过法理培训。CD4+和CD8+T蛋白质最佳蛋白质培训有条件各不相同，这因为CD4 +和CD8 + T蛋白质接收器转导简而言之不一所发。此部份，蛋白质裂解法可掺入对effectT蛋白质治疗发挥起到潜在危害的Treg蛋白质。况且，必均只需从皮下注射的T蛋白质之中掺入蛋白质，对肺癌极高血压而言，这常常不具考验机制性。然而，在GMP生产商之中有些技精使蛋白质化学合成运输成本大大增加，如通过流式蛋白质精或磁珠分选蛋白质可使运输成本短时间段增加10000美元甚至非故常多。

成年极其再加要问题

与上述极其再加要问题相关，皮下注射处于什么发挥起到阶段的T蛋白质最佳？对肠道和人类文明的分析结果声称，naive或之的中心梦境蛋白质是比较好的。对只有极少量naive T蛋白质的老年人而言，如何提供这类蛋白质是个考验，且化疗或其他胃癌通故常会进一步放大难度。从我们有别于CD19 特异色机制性CAR-T眼疾人肺癌极高血压的所示表之中声称，扩充技能是数据分析最终的最最主要的分子生物学学徽章。一种方法有是在全血淋巴蛋白质之中裂解之的中心梦境或naive T蛋白质。与此意味著，一个非故常有用粗放的方法有是用到大量T蛋白质在特定培训有条件下维持naive或之的中心型梦境蛋白质的扩充。后一种方法有基于特异色机制性合计性刺激接收器可以亦同使蛋白质定向发挥起到的物理反常。如CD28的性刺激可使CD4蛋白质保持之的中心梦境蛋白质静止状态，4-1BB可以亦同使CD8之的中心梦境蛋白质的转化。意味著ICOS合计性刺激底物可以亦同使和稳定Th17蛋白质的生长。为了让T蛋白质的干蛋白质所发特机制性是极为有希望的，Wnt接收器自营的应答可以亦同进梦境干蛋白质的转化。

究竟发挥起到统一的最佳蛋白质类产品线？抑或针对各不相同的必均只需各不相同的？

CD19 CAR-T眼疾人B蛋白质恶机制性辨识显现出的惊人且巧合的能否用到在眼疾人对等糙极高血压背上还未可知。我们推测CAR-T在体部份致病很低发挥起到腺癌蛋白质的效率典型肺癌。然而，即使如此确有进一步具体究竟必均只需修改蛋白质分成特性或蛋白质培训有条件，用来最佳化对等糙极高血压血液改建的T蛋白质的输送和持久机制性。与恶机制性血液胃癌的散在分布各不相同，有别于蛋白质扩建工程的方法有最佳化T蛋白质向对等糙块输送，如成胶质蛋白质糙和胰腺癌，不太可能会有所各不相同。已提显现出一种方法有是为了让蛋白质表述策略，如有别于蛋白质扩建工程的意图，用到各种特异色性或特异色性蛋白亦同使T蛋白质向各部位富集。其他方法有包括对或极高血压透过预执行，如透过放疗，注射溶糙小分子以及在糙内如此一来注射T蛋白质。

最优的合计应答在结构上部份延在CD4+和CD8+ T蛋白质内是一所发的吗？

同特性分析声称各不相同亚群的T蛋白质培训有条件是各不相同的。这就提显现出一个极其再加要问题，各不相同淋巴蛋白质亚群的T蛋白质究竟必均只需各不相同的接收器底物透过武装呢？为筹划解决问题这个极其再加要问题我们对CD4+和CD8+T蛋白质胞内区CD28， 4-1BB和ICOS透过了风险评估。在生命体克隆腺癌的人源化肠道之中，我们推测有别于ICOS接收器部份延的CD4+ CAR-T蛋白质非故常为优越，而CD8+T蛋白质故常譬如话说4-1BB。如此增加蛋白质化学合成的最优化究竟能使诊断实验受益尚确有进一步具体。此部份，最佳的T蛋白质亚群比例和接收器底物的内部在结构上在各不相同的微生态之中很不太可能会有差异色。比如在一些诊断从前三维之中改建的Th17蛋白质比Th1蛋白质非故常优越。

生存与毁灭：自杀在结构上能否消退非蛋白质表述造成了的毒机制性？

用到改建的T蛋白质最大的不具体机制性是为了让分子生物学合成技精作用于的最初、增强的蛋白质effect究竟会引发意部份事故的脱靶毒机制性。CAR-T蛋白质的非蛋白质表述毒机制性和TCR蛋白质的脱靶毒机制性被格部份瞩目。有多种方法有可以减轻这些极其再加要问题。我们推测为了让编码CAR的mRNA转染T蛋白质，管制CAR大部分在转染T蛋白质之中表述，对风险评估用到的如此一来毒机制性有帮助。当用到毒机制性化学反应，停止蛋白质皮下注射，毒机制性会短时间段消退。分析人员也提显现出了许多作用于蛋白质在结构上上T蛋白质凋亡的方法有。这些方法有很不太可能都会被导入，以便按只需清洗T蛋白质，保证严格的安全只供给。

得显现出结论

基于自始在透过的试验，表述CARs和TCRs的T蛋白质今天为较广的商业应用领部份延准备就绪。投机者的资源自始推动这个曾因入股欠缺而被管制的应用领部份延的革新。在皮下注射的T蛋白质之中替换成或截图蛋白质，给予了能抛开病原体会诱发微生态的新蛋白质类产品线，并且最后不太可能不必均只需用到病原体会极高级别封闭抑制体。ACT新技术的蛋白质扩建工程技精的预见到，将会使为了让合成分子生物学学物理反常透过胃癌、慢机制性感染和脑性机制性胃癌的眼疾人赢取显着实质性。

原始原文：

Barrett DM, Grupp SA, June CH.Chimeric Antigen Receptor- and TCR-Modified T Cells Enter Main Street and Wall Street. J Immunol. 2015 Aug 1;195(3):755-61.